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流式课堂 | 数据对不上？细胞周期&CCK-8结果关联性分析
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你有这样的经历吗？做了大半年的实验，CCK-8、周期、凋亡、ELISA……实验做了一大堆，结果一分析，数据全都对不上。
· 处理后CCK-8检测显示，明显有抑制增殖的效果
· 但是凋亡检测发现，处理后凋亡率反而下降了
· 周期检测中各组更是没有任何变化
先别着急，真相往往隐藏在这看似“冲突”的实验结果中，也许你的结果没有任何问题。
今天Elabsciecne流式课堂给大家分享：CCK-8与细胞周期结果之间的关系
要分析这两个实验结果的关系，我们首先得准确知道每个实验结果的真实含义。
有人可能就会说了，这还不简单嘛，CCK-8表示细胞增殖速度，细胞周期检测结果表示细胞周期中各时期的比例。对此，我只能说：对了，但不完全对。
准确来说，CCK-8检测的是样本中脱氢酶总活力，细胞周期检测的是每个细胞的核酸含量。
▲ CCK-8检测原理示意图
▲ 周期检测原理示意图
只有从这个层面去看待我们的实验结果，才能找到问题的根本。
根据实验原理，我们可以得知，通过CCK-8检测到OD值发生了变化，可能是由以下原因造成：
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OD值升高 |
OD值降低 |
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细胞数量增加 |
细胞数量降低 |
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细胞活力增加 |
细胞活力降低 |
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实验体系中存在还原剂 |
实验体系中存在氧化剂 |
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加入药物呈黄色或浑浊 |
实验体系中含有金属离子 |
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…… |
…… |
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同样地，细胞周期检测出现异常，也可以从实验原理中找到合理的解释。核酸所指的除了细胞核中的DNA外，还包含RNA等多种物质，这些物质都可以与PI结合，从而影响结果分析。更多细胞周期检测异常情况分析及解决方案的相关知识，请点击跳转阅读细胞周期检测三大常见问题及解决方案。
在分析CCK-8与周期关系之前，我们首先需要排除异常原因带来的结果变化。如：
1 样本中含有氧化还原剂/金属离子/有色药物等，在进行CCK-8检测前，应先进行换液；
2 在进行细胞周期检测时，应注意控制细胞接种密度，培养时细胞密度不可过大，避免细胞间产生接触抑制，从而大量停留在G0期；
3 在进行细胞周期检测时，需添加RNase，避免RNA对结果造成的影响。
完成以上工作后，我们就来看看CCK-8与细胞周期之间存在的变化关系，及其可能的原因：
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CCK-8 |
细胞周期 |
参考原因 |
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抑制增殖 |
G0/G1期增加 |
药物抑制DNA复制 |
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G2/M期增加 |
药物抑制有丝分裂 （如丝裂霉素等） |
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S期增加 |
药物导致G2/M期阻滞后继续处理导致DNA断裂，部分核酸泄露 |
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促进增殖 |
G0/G1期增加 |
细胞接种密度过大 |
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G2/M期增加 |
正常促进细胞增殖 |
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S期增加 |
正常促进细胞增殖 |
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本期实验相关试剂
细胞周期检测试剂盒(DNA含量检测) E-CK-A351
增强型细胞活力检测试剂盒(CCK-8) E-CK-A362
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